Сложные методы окраски в микробиологии

Роль сложных методов окраски в изучении микробов

В микробиологии сложные методы окраски неразрывно связаны с изучением морфологии и ультраструктуры бактерий. В отличие от простых методов, они позволяют не только увидеть форму микроорганизма, но и оценить его тинкториальные свойства — способность воспринимать и удерживать определенные красители.

Эти методы применяются при микроскопии для дифференциации различных групп микроорганизмов, включая:

• Грамположительные палочки неправильной формы (возбудители дифтерии, туберкулеза, лепры).
• Актиномицеты и спирохеты.
• Внутриклеточные паразиты (риккетсии, хламидии) и микоплазмы.

Оценка тинкториальных свойств является важнейшим этапом после выделения чистой культуры бактерий на дифференциально-диагностических или элективных питательных средах.

Окраска по Граму в диагностике респираторных инфекций

Самым известным сложным методом является окраска по Граму. В клинической микробиологии она выступает стандартом первичной бактериоскопии.

При подозрении на внебольничную пневмонию бактериоскопическое исследование мокроты с окраской по Граму показано абсолютно всем пациентам (при наличии самой мокроты). Этот метод работает в связке с культуральным исследованием (посевом).

Микробиологическая диагностика всегда дополняется лабораторными маркерами. В общем клиническом анализе крови оценивают лейкоцитоз и сдвиг формулы влево. Повышение С-реактивного белка (СРБ) более 50 мг/л служит диагностическим критерием, а рост прокальцитонина (ПКТ) выше 0,5 нг/мл указывает на бактериальную природу процесса и помогает решить вопрос о назначении антибиотиков при вирусно-бактериальных ко-инфекциях.

В сложных случаях, когда требуется верификация атипичной флоры или вирусных возбудителей, микроскопию дополняют ПЦР (исследуют мокроту, кровь, трахеальный или плевральный экссудат). Если у пациента наблюдается тяжелое течение или нет ответа на терапию, назначают посев крови (гемокультуру). При наличии показаний к плевральной пункции также проводится бактериологический анализ экссудата.

Применение метода при исследовании абсцессов

Сложные методы окраски критически важны при анализе диагностической жидкости, полученной в ходе чрескожного дренирования абсцессов под лучевым контролем. Сегодня этот метод является выбором для лечения большинства абсцессов (до 97% внутрибрюшных скоплений дренируются чрескожно).

Когда врач эвакуирует гнойное содержимое, полученный образец обязательно отправляется на микробиологическую оценку. Базовый алгоритм исследования жидкости включает:

1. Окраску по Граму (Gram stain) для быстрой визуализации микрофлоры.
2. Посев и определение чувствительности к антибиотикам (culture and sensitivity).
3. Подсчет клеток для количественной оценки лейкоцитов.

Результаты окраски и последующего посева позволяют назначить пациенту адекватную таргетную антибиотикотерапию. Это особенно важно, так как инфицированные скопления жидкости накапливают антибиотики в ограниченной степени. Без эвакуации гноя консервативное лечение эффективно только при микроскопических размерах очага (1–3 см). Дренирование может применяться как самостоятельный метод, так и как временная мера перед радикальной операцией.

Дифференциальная диагностика скоплений жидкости

Помимо бактериоскопии с окраской по Граму, диагностическая жидкость исследуется на специфические маркеры, чтобы определить источник скопления. К таким маркерам относятся:

• Амилаза — указывает на панкреатическое происхождение жидкости.
• Билирубин — подтверждает билиарное происхождение.
• Лимфоциты — свидетельствуют о лимфатическом генезе.
• Креатинин — характерен для скоплений мочевого происхождения (например, при уриноме или гидронефрозе).

Получение образца жидкости для диагностических целей с последующей окраской возможно даже из сложных локализаций. Иногда для прохождения через тонкую кишку используют тонкую иглу (19–22-G), хотя это несет риск инфицирования скопления кишечной микрофлорой. Абсолютным противопоказанием к процедуре является только отсутствие безопасного чрескожного доступа (например, когда скопление окружено петлями кишечника и крупными сосудами).

Вопросы с занятий и экзамена

Что ещё разобрать по теме

• Тинкториальные свойства и структурные элементы бактерий
• Классификация бактерий по потребностям в условиях роста и культивирования
• Дифференциально-диагностические и элективные питательные среды
• Методы выделения чистой культуры бактерий
• Правила забора материала для бактериологического исследования

Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.