Материал для исследования и экспресс-диагностика
Начальным и важнейшим этапом диагностики является правильный забор клинического материала. При подозрениях на вирусные инфекции дыхательных путей на анализ отправляют секреты респираторного тракта: смывы и мазки-отпечатки из носа и зева, а также носоглоточную слизь.
Для максимально быстрого получения результатов в современной клинической практике применяют методы экспресс-диагностики. Их главная цель — оперативное обнаружение следов возбудителя в организме пациента:
- Выявление вирусных антигенов. Осуществляется непосредственно в пораженных клетках респираторного тракта. Для этого используют реакцию иммунофлюоресценции (РИФ, включая прямую и непрямую модификации), а также иммуноферментный анализ (ИФА).
- Выявление генетического материала. Проводится с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Этот метод имеет критическое значение и особенно актуален при поиске труднокультивируемых вирусов, которые тяжело или невозможно вырастить стандартными лабораторными способами.
Вирусологический метод (культивирование)
Классический вирусологический метод подразумевает изоляцию возбудителя. В качестве питательной среды выступают культуры клеток, которые заражаются секретом респираторного тракта пациента.
После внесения материала процесс делится на два последовательных этапа:
1. Индикация вируса Это этап первичного обнаружения факта присутствия любого вируса в культуре. На успешное размножение возбудителя указывают следующие феномены:
- Появление цитопатического эффекта (ЦПЭ) — видимых изменений или гибели клеток.
- Положительная реакция гемагглютинации (РГА) и гемадсорбции (характерно для вирусов, обладающих особыми гемагглютинирующими свойствами).
- Образование специфических внутриклеточных включений. Местоположение включений может подсказать тип вируса: например, внутриядерные включения типичны для аденовирусов, а цитоплазматические околоядерные — для реовирусов.
- Использование метода «бляшек» и проведение «цветной пробы».
2. Идентификация вируса После того как присутствие вируса доказано, необходимо определить его вид. Идентификация проводится путем изучения антигенной структуры возбудителя. Для этого применяют широкий спектр серологических реакций: РСК, РПГА, ИФА, РТГА и реакцию нейтрализации (РН).
Серологический метод
Серологическая диагностика базируется на оценке гуморального иммунного ответа организма на внедрение возбудителя. Основной принцип метода — исследование парных сывороток крови пациента.
Ключевые особенности серологического подхода:
- Сроки забора: первую сыворотку берут в начале заболевания, вторую — с интервалом в 10–14 дней.
- Диагностический критерий: диагноз считается подтвержденным только в том случае, если наблюдается нарастание титра специфических антител в 4 раза и более.
- Используемые реакции: реакция нейтрализации (РН), реакция связывания комплемента (РСК), реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) и реакция торможения гемагглютинации (РТГА).
Важно отметить клиническое значение данного метода. Поскольку средняя продолжительность неосложненной ОРВИ составляет всего 5–7 дней, серологический метод занимает больше времени, чем само заболевание (из-за необходимости ждать наработки антител). Поэтому он служит преимущественно для ретроспективной диагностики (подтверждения уже перенесенной инфекции) и проведения детального эпидемиологического анализа в популяции.
Три ступени диагностики: Экспресс — ищем «детали» вируса (ПЦР, ИФА); Вирусология — «выращиваем» вирус в клетках; Серология — ищем ответ организма (антитела в парных сыворотках).
Вопросы с занятий и экзамена
Почему серологический метод используется в основном для ретроспективной диагностики?
Продолжительность клинических проявлений болезни обычно составляет 5–7 дней, что значительно короче времени, необходимого для полноценной наработки антител. Для достоверного анализа требуются парные сыворотки с интервалом 10–14 дней, когда пациент уже выздоравливает.
Что является абсолютным диагностическим критерием при исследовании парных сывороток?
Достоверным подтверждением перенесенной инфекции служит нарастание титра специфических антител во второй сыворотке в 4 раза и более по сравнению с первой.
В чем заключается этап индикации при вирусологическом методе?
Индикация — это обнаружение самого факта размножения вируса в культуре клеток. О ней судят по цитопатическому эффекту, образованию включений, методу «бляшек», а также реакциям гемагглютинации и гемадсорбции.
Какой метод лучше всего подходит для диагностики труднокультивируемых вирусов?
Для возбудителей, которые плохо растут на культурах клеток, оптимально применять ПЦР, так как этот метод позволяет напрямую выявить генетический материал вируса.
Что ещё разобрать по теме
- Механизмы формирования цитопатического эффекта (ЦПЭ) в культурах клеток
- Принципы постановки реакций гемагглютинации (РГА) и гемадсорбции
- Морфологические отличия внутриядерных и цитоплазматических включений
- Методика проведения «цветной пробы» и метода «бляшек»
- Алгоритм постановки реакции связывания комплемента (РСК) при идентификации
Разберите тему целиком в курсе «Микробиология»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Микробиологическая диагностика ОРВИ» и ещё 4 383 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 141 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «Возбудители ОРВИ»
Весь раздел «Возбудители ОРВИ»Бесплатные видеоуроки: микробиологияКороткие уроки с конспектами — без регистрации.
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.