1. Выявление межклеточных структур и коллагеновых волокон
Для детального изучения волокнистого каркаса внутренних органов и надежной дифференцировки коллагена от других тканевых элементов (например, от мышечной ткани или эпителия) обычные простые красители неэффективны. В гистологии для этих целей применяются сложные многокомпонентные смеси.
Окраска по методу Маллори Этот метод основан на использовании химической смеси сразу трех активных компонентов: кислого фуксина, анилинового синего и оранжевого G. В результате такой сложной обработки ткани приобретают контрастные и легко различимые оттенки:
- Коллагеновые волокна избирательно окрашиваются в насыщенный темно-синий цвет.
- Другие структуры (в частности, мышечные элементы) приобретают различные темно-красные или оранжевые тона.
В гистологической практике метод Маллори активно применяется для выявления прослоек рыхлой волокнистой соединительной ткани внутри различных органов. Характерный пример — срез скелетной мышцы: на препарате сами мышечные волокна будут выглядеть красными, а соединительнотканные прослойки между ними — темно-синими. Дополнительно этот метод успешно используется для сложной дифференцировки эндокринных клеток гипофиза.
Окраска по методу ван Гизона Вторая классическая методика дифференцировки использует смесь всего двух компонентов: пикриновой кислоты и кислого фуксина. При окрашивании по методу ван Гизона:
- Коллагеновые волокна становятся ярко-красными.
- Остальные элементы (мышечная ткань и эпителиальные клетки) окрашиваются в контрастный желтый цвет.
2. Импрегнация ретикулярных волокон серебром
Специфические ретикулярные волокна образуют тонкую и прочную опорную сеть (строму) многих органов. Для их визуализации не подходят стандартные смеси красителей, поэтому применяется метод импрегнации серебром.
Принцип данной химической методики базируется на явлении аргирофилии — выраженном сродстве определенных микроскопических структур к ионам серебра. Механизм окраски основан на биохимическом составе самих волокон: они чрезвычайно богаты специфическими сульфатными группами, с которыми прочно связывается серебро.
Процесс протекает в несколько последовательных этапов:
- Гистологический препарат обрабатывают специальным аммиачным раствором серебра.
- Применяют восстановители, задача которых — вызвать осаждение чистого металлического серебра непосредственно на волокнах.
В результате такой гистохимической реакции ретикулярные волокна окрашиваются в насыщенный черный цвет, образуя четко видимую сеть. Классическим примером использования этой методики является изучение лимфатического узла, где отчетливо визуализируется густая строма из черных ретикулярных волокон.
3. Окраска эластических элементов
Для микроскопического исследования эластических структур, обеспечивающих упругость тканей, применяют два основных подхода: избирательный и дифференциальный.
А. Окраска орсеином (избирательный метод) Орсеин специфически выявляет эластические элементы. При его использовании эластические волокна и мембраны приобретают насыщенный вишневый цвет. Все остальные тканевые элементы формируют слабо-розовый фон. Классический препарат для этой методики — средняя оболочка аорты, где выявляются толстые, извилистые, концентрически расположенные окончатые эластические мембраны.
Б. Окраска пикрофуксином и гематоксилином (дифференциальный метод) Этот подход позволяет на одном гистологическом препарате четко различить сразу несколько типов волокон и клеточных структур. При такой комбинированной окраске:
- Эластические волокна окрашиваются в желтый цвет.
- Коллагеновые волокна приобретают красный цвет.
- Ядра клеток становятся фиолетовыми.
Отличным примером служит эластическая связка, на срезе которой под микроскопом хорошо видны мощные пучки желтых эластических волокон и расположенные между ними фиброциты с фиолетовыми ядрами.
Маллори красит коллаген в темно-синий (как чернила), а ван Гизон — в ярко-красный. Ретикулярные волокна всегда черные (серебро), а эластические элементы при окраске орсеином — вишневые.
Вопросы с занятий и экзамена
Как отличить коллагеновые волокна от мышечной ткани на гистологическом препарате?
С помощью специальных окрасок. По методу Маллори коллаген будет темно-синим, а мышцы — красными или оранжевыми. При окраске по ван Гизону коллаген станет ярко-красным, а мышечная ткань приобретет контрастный желтый цвет.
В чем суть метода импрегнации серебром и для чего он применяется?
Метод основан на аргирофилии — способности тканей связывать серебро. Серебро взаимодействует с сульфатными группами ретикулярных волокон, а затем восстанавливается до металла. Это позволяет окрасить ретикулярную строму (например, в лимфатическом узле) в черный цвет.
Какими методами можно выявить эластические волокна?
Используют избирательную окраску орсеином, который красит эластику в вишневый цвет на слабо-розовом фоне. Также применяют дифференциальный метод (пикрофуксин с гематоксилином): эластика становится желтой, коллаген — красным, а ядра клеток — фиолетовыми.
Что ещё разобрать по теме
- Химический состав и свойства компонентов в методе Маллори (кислый фуксин, анилиновый синий, оранжевый G)
- Морфология и функции толстых окончатых эластических мембран в стенке аорты
- Особенности строения эластической связки и расположение фиброцитов
- Дифференцировка эндокринных клеток гипофиза с применением специальных окрасок
- Механизмы восстановления металлического серебра на сульфатных группах волокон
Разберите тему целиком в курсе «Гистология»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Специальные методы окраски в гистологии» и ещё 3 438 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 137 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «Техника гистологического исследования»
Бесплатные видеоуроки: гистологияКороткие уроки с конспектами — без регистрации.
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.