Импрегнация нитратом серебра
Данный метод применяется с целью визуализации тел нервных клеток (нейронов) и их отростков. Важно отметить, что методика направлена именно на эти структуры, а не на выявление миелиновых оболочек, глиальных клеток или синаптических пузырьков.
Процесс требует специфической пробоподготовки. Во-первых, необходима длительная фиксация материала в формалине, которая должна продолжаться не менее семи дней. Во-вторых, для получения качественных срезов на замораживающем микротоме образец предварительно уплотняют методом замораживания.
После подготовки срезы обрабатывают растворами азотнокислого серебра (или аммиачным серебром) с последующим восстановлением. Принцип окрашивания заключается в том, что клетки и волокна нервной системы избирательно приобретают черный цвет, тогда как окружающие ткани окрашиваются в контрастный светло-коричневый оттенок. На препарате среза спинного мозга хорошо различимы тела нервных клеток с темной цитоплазмой и более светлым ядром, а также четко контурируются отростки нейронов.
Выявление базофильных структур (окраска по Нисслю)
Для обнаружения специфических структур внутри нейрона применяют окраску по методу Ниссля, которая гистологически отличается от методов Гольджи, Вейгерта или рутинной окраски гематоксилином и эозином. В качестве реактива используется краситель толуидиновый синий.
Принцип действия метода базируется на том, что краситель активно связывается с умеренно базофильными соединениями. Главная цель — визуализация глыбок базофильного вещества, также известного как тигроид или субстанция Ниссля.
В результате окрашивания эти структуры приобретают насыщенный синий цвет. При изучении нейрона спинного мозга можно отметить четкую локализацию базофильного вещества: глыбки в большом количестве содержатся непосредственно в теле нейрона, а также присутствуют в некоторых его отростках, в частности — в дендритах.
Выявление миелина с помощью осмиевой кислоты
Для исследования миелиновых нервных волокон применяется метод фиксации или импрегнации осмием (осмиевой кислотой). Миелиновая оболочка имеет ярко выраженную мембранную, то есть липидную, природу, что определяет выбор реактива. Метод не направлен на фибриллярные, углеводные или белковые компоненты.
Принцип действия основан на том, что метод строго специфичен для структур, богатых жирами (липидами). Осмиевая кислота обладает способностью растворяться в липидных каплях и мембранах. Благодаря свойству осмиофилии (способности связывать осмий), липидсодержащая миелиновая оболочка приобретает темный, черный цвет.
На поперечном срезе нервного волокна после такой обработки четко визуализируются две основные зоны: в центральной части располагается неокрашенный осевой цилиндр (аксон), а на периферии — толстая миелиновая оболочка черного цвета.
С-О-Н: Серебро — Силуэт нейрона (тело и отростки черные), Осмий — Оболочка (липидный миелин черный), Ниссль — Нуклеопротеиды/базофилия (тигроид синий).
Вопросы с занятий и экзамена
Почему при импрегнации серебром ядро нейрона выглядит светлым?
Метод избирательно окрашивает цитоплазму и отростки в черный цвет за счет восстановления серебра, в то время как ядро слабее связывает металл и остается светлым на фоне темной цитоплазмы.
Где локализуются базофильные глыбки при окраске по Нисслю?
Глыбки базофильного вещества (тигроид) располагаются непосредственно в теле нервной клетки, а также заходят в проксимальные отделы дендритов.
За счет чего осмиевая кислота окрашивает миелиновые волокна?
Миелиновая оболочка имеет липидную природу. Осмиевая кислота растворяется в липидах, и благодаря свойству осмиофилии оболочка связывает осмий, приобретая черный цвет.
Что ещё разобрать по теме
- Морфологические особенности мотонейронов переднего рога спинного мозга.
- Гистология псевдоуниполярных нейронов спинномозгового узла.
- Строение пирамидных клеток коры больших полушарий.
- Методы окраски по Шморлю и импрегнация солями золота.
Разберите тему целиком в курсе «Гистология»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Выявление элементов нервной системы» и ещё 3 438 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 137 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «Техника гистологического исследования»
Бесплатные видеоуроки: гистологияКороткие уроки с конспектами — без регистрации.
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.