Экспресс-диагностика и молекулярные методы
Эти подходы позволяют максимально быстро обнаружить возбудителя в клиническом материале (смывах из носоглотки, мазках-отпечатках, мокроте или крови).
- Молекулярно-генетический метод: направлен на прямое выявление генетического материала. Основной инструмент — полимеразная цепная реакция (ПЦР). Для выявления РНК-содержащих вирусов (например, вируса гриппа) используется ПЦР с обратной транскрипцией. Метод особенно актуален для вирусов, которые трудно поддаются культивированию.
- Экспресс-диагностика: базируется на поиске вирусных антигенов непосредственно в зараженных клетках. Для этого применяют реакцию иммунофлюоресценции (РИФ) и иммуноферментный анализ (ИФА).
Вирусологический метод
Считается «золотым стандартом» диагностики. Это классический и наиболее достоверный способ, который включает три последовательных этапа:
- Культивирование (накопление): вирусы не растут на искусственных питательных средах, поэтому их размножают в живых системах. Используют куриные эмбрионы, лабораторных животных или культуры клеток (например, первичные культуры почек обезьян, собак или макак-резус).
- Индикация (обнаружение): подтверждение того, что вирус успешно размножился. На животных это оценивают по гибели или клинико-патоморфологическим изменениям. В культурах клеток ориентируются на цитопатический эффект (ЦПЭ), образование «бляшек» или результаты «цветной пробы». Также используют свойства самих вирусов — способность вызывать реакции гемагглютинации (РГА) и гемадсорбции. Иногда внутри клеток находят специфические включения: внутриядерные (аденовирусы), цитоплазматические околоядерные (реовирусы) или тельца Гварниери (натуральная оспа).
- Идентификация (определение типа): установление точного вида возбудителя по его антигенной структуре. Применяют реакции связывания комплемента (РСК), торможения гемагглютинации (РТГА), ИФА и реакцию биологической нейтрализации (РБН).
Серологический метод
Метод основан на поиске специфических антител в крови пациента с помощью реакций РТГА, РСК, ИФА, РПГА и реакции нейтрализации (РН).
- Принцип: исследование парных сывороток. Первую порцию крови забирают в начале болезни, вторую — спустя 10–14 дней.
- Критерий диагноза: достоверным подтверждением инфекции считается нарастание титра антител во второй сыворотке в четыре раза и более.
- Клиническое значение: чаще всего метод используется для ретроспективной диагностики (подтверждения диагноза постфактум) и эпидемиологического анализа. Это связано с тем, что острая фаза многих болезней длится 5–7 дней, и пациент выздоравливает быстрее, чем организм успевает выработать высокий уровень антител.
Особенности диагностики и профилактики
Выбор методов зависит от свойств конкретного возбудителя:
- Респираторные инфекции: для вирусов с гемагглютинирующими свойствами (например, парагриппа) важнейшим критерием индикации выступает феномен гемадсорбции. Постинфекционный иммунитет при таких заболеваниях часто непрочный и типоспецифический, что делает возможной реинфекцию.
- Особо опасные инфекции (ООИ): работа с вирусом натуральной оспы требует строжайшего режима. Для индикации применяют электронную микроскопию, РИФ и поиск телец Гварниери. Специфическая профилактика оспы исторически проводилась прочной живой вакциной (получаемой из соскобов сыпи телят или на куриных эмбрионах). Вакцину вводили накожно, безыгольным инъектором или в виде оральных таблеток (разработка А.А. Воробьева). Благодаря вакцинации оспа была глобально ликвидирована, и обязательные прививки отменили в 1980 году.
Для запоминания этапов вирусологического метода используйте правило «Три И»: Изоляция (культивирование вируса), Индикация (обнаружение факта его размножения) и Идентификация (определение точного вида по антигенам).
Вопросы с занятий и экзамена
Почему серологический метод чаще используют для ретроспективной диагностики?
Длительность многих вирусных инфекций (например, ОРВИ) составляет 5–7 дней, что значительно короче времени, необходимого для наработки антител (10–14 дней). Поэтому диагноз лабораторно подтверждается уже после выздоровления пациента.
Что такое парные сыворотки и зачем они нужны?
Это два образца крови пациента, взятые с интервалом в 10–14 дней. Они необходимы для отслеживания динамики иммунного ответа: диагноз подтверждается только при четырехкратном (и более) нарастании титра антител во второй сыворотке.
Как обнаружить вирус в культуре клеток, если его не видно в световой микроскоп?
Присутствие вируса (индикацию) определяют по косвенным признакам: разрушению клеток (цитопатический эффект), образованию «бляшек», изменению цвета питательной среды («цветная проба») или способности зараженных клеток склеивать эритроциты (гемадсорбция).
Что ещё разобрать по теме
- Механизмы реакций гемагглютинации (РГА) и гемадсорбции
- Виды цитопатического эффекта и внутриклеточных включений
- Особенности забора клинического материала при респираторных инфекциях
- Принципы работы в лабораториях с особо опасными инфекциями (ООИ)
- История создания и виды вакцин против натуральной оспы
Разберите тему целиком в курсе «Микробиология»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Методы вирусологии» и ещё 4 383 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 141 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «Дополнительные темы»
Бесплатные видеоуроки: микробиологияКороткие уроки с конспектами — без регистрации.
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.