Принципы диагностики и забор материала
Глобально лабораторная диагностика гриппа развивается в трех основных направлениях:
- Выделение и последующая идентификация самого вируса.
- Индикация вирусных антигенов или молекул РНК непосредственно в клетках.
- Серологическое исследование, направленное на поиск специфических антител.
Для успешного выявления возбудителя критически важно правильно собрать клинический материал. Оптимальным сроком для взятия отделяемого носоглотки (в виде мазков или смывов) и мазков-отпечатков со слизистой оболочки носа являются первые три дня от начала заболевания. Именно в этот период концентрация вирусных частиц на слизистых оболочках достигает максимума.
Экспресс-диагностика и молекулярно-генетический метод
Если врачу требуется быстро получить предварительные данные, применяются методы экспресс-диагностики. Их главная мишень — структурные вирусные антигены в собранном биоматериале. Для их визуализации и обнаружения лаборатории используют реакцию иммунофлюоресценции (РИФ, как в прямом, так и в непрямом варианте), а также иммуноферментный анализ (ИФА).
Молекулярно-генетический метод ставит своей целью прямое выявление генетического аппарата возбудителя. Поскольку геном данного инфекционного агента представлен цепочкой РНК, основным инструментом поиска выступает полимеразная цепная реакция (ПЦР) с этапом обратной транскрипции. Этот подход позволяет с высочайшей точностью обнаружить вирусную РНК в клинических пробах.
Вирусологический метод («Золотой стандарт»)
Классическое выделение вируса считается эталонным, но наиболее сложным подходом. Он строго разделен на три последовательных этапа:
- Культивирование (накопление). Для размножения вируса необходимы живые биологические системы. В лабораторной практике используют развивающиеся куриные эмбрионы, лабораторных животных или культуры клеток. К последним относятся первичные культуры клеток почек обезьян, макак-резус или собак.
- Индикация. На этом этапе подтверждается сам факт размножения вируса в системе. В культурах клеток о присутствии возбудителя говорит развитие цитопатического эффекта (ЦПЭ), формирование специфических «бляшек» или изменение цвета среды в «цветной пробе». При использовании животных судят по их гибели или характерным клинико-патоморфологическим изменениям. Также факт репродукции подтверждают по свойствам самого вируса, применяя реакции гемагглютинации (РГА) и гемадсорбции.
- Идентификация. Финальный шаг — определение конкретного вида и типа выделенного агента. Эта процедура базируется на детальном изучении его антигенной структуры. С этой целью ставят реакции связывания комплемента (РСК), торможения гемагглютинации (РТГА), биологической нейтрализации (РБН) и ИФА.
Серологический метод
В отличие от генетического или вирусологического поиска, серологический метод оценивает не самого возбудителя, а реакцию иммунной системы пациента.
Фундаментальный принцип метода заключается в исследовании парных сывороток крови. Первую порцию крови забирают в самом начале болезни, а вторую — спустя 10–14 дней. Строгим критерием подтверждения диагноза является минимум четырехкратное нарастание титра антител во второй сыворотке по сравнению с первой.
Для оценки уровня антител применяются различные реакции: РТГА, РСК, ИФА и реакция нейтрализации (РН). Из-за необходимости длительного ожидания второй порции сыворотки этот метод не подходит для раннего выявления болезни. Он имеет преимущественно ретроспективное значение, позволяя достоверно подтвердить диагноз уже после перенесенного эпизода инфекции.
Правило «четырех» для серологии: диагноз подтверждается только при четырехкратном нарастании титра антител в парных сыворотках, которые берут с интервалом около 14 (число оканчивается на 4) дней.
Вопросы с занятий и экзамена
Почему серологический метод не используют для экстренной диагностики?
Потому что для его проведения требуются парные сыворотки с интервалом забора в 10–14 дней. Этот метод предназначен для ретроспективного подтверждения диагноза, когда пациент уже выздоравливает.
Как доказывают факт размножения вируса в клеточной культуре?
Об этом судят на этапе индикации по развитию цитопатического эффекта, появлению «бляшек», изменениям в «цветной пробе», а также с помощью реакций гемагглютинации (РГА) и гемадсорбции.
Какой биологический материал лучше всего брать для поиска РНК вируса?
Оптимально использовать отделяемое носоглотки (смыв или мазок) и мазки-отпечатки со слизистой оболочки носа, собранные в первые 3 дня от начала болезни.
Что ещё разобрать по теме
- Механизм постановки ПЦР с обратной транскрипцией
- Принципы чтения результатов реакций гемагглютинации (РГА) и гемадсорбции
- Особенности культивирования вирусов на куриных эмбрионах
- Антигенная структура вирусов и ее роль на этапе идентификации
Разберите тему целиком в курсе «Микробиология»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Микробиологическая диагностика гриппа» и ещё 4 383 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 141 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «Ортомиксовирусы (грипп)»
Бесплатные видеоуроки: микробиологияКороткие уроки с конспектами — без регистрации.
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.