Основные подходы к микробиологическому исследованию
Микробиологическая диагностика опирается на исследование разнообразного клинического материала, выбор которого зависит от локализации инфекционного процесса. В лабораторию могут направляться фекалии, мокрота, моча или кровь.
Для точного определения возбудителя применяется комплекс методов. Бактериологический метод является классическим: он начинается с посева материала на селективные питательные среды. После этого специалисты выделяют чистую культуру микроорганизма и проводят обязательное тестирование на ее токсигенность.
В качестве современных дополнений используются молекулярно-генетические методы, в первую очередь ПЦР, которая позволяет идентифицировать выделенную культуру. Если же необходимо обнаружить бактериальный токсин непосредственно в самом исследуемом материале (например, в фекалиях), применяют иммунохимический подход — иммуноферментный анализ (ИФА).
Алгоритм диагностики эшерихиозов
Логика выявления эшерихий строго выстроена от момента забора материала до финальной идентификации. При кишечных инфекциях исследуют испражнения пациента. Если инфекция носит парентеральный (внекишечный) характер, материалом служат моча, кровь, отделяемое ран или ткани из конкретного инфекционного очага.
Алгоритм посева требует, чтобы весь собранный материал (за исключением крови) засевался на дифференциальные лактозосодержащие среды. Классическими примерами таких сред являются среды Эндо и Левина. Засеянные чашки Петри отправляют на инкубацию, которая длится 18 часов при температуре 37 °C.
На этапе отбора и идентификации лаборанты ищут колонии, способные давать реакцию агглютинации с поливалентными ОВ-сыворотками. Далее проводится биохимическая идентификация бактерии до конкретного вида. Финальным и важнейшим этапом диагностики эшерихиозов является точное определение серологического варианта возбудителя.
Специфика выявления микобактерий
Диагностика микобактериозов во многом схожа с алгоритмами выявления туберкулеза, однако имеет свои специфические задачи. Главная из них — дифференциация: необходимо четко определить, принадлежит ли выделенная чистая культура к истинным возбудителям туберкулеза или это нетуберкулезная микобактерия.
Основным методом здесь также выступает бактериологический (культуральный). Процесс разделен на два уровня:
- Первичная идентификация проходит в базовых лабораториях противотуберкулезных диспансеров. Там оценивают скорость роста бактерий, пигментообразование, морфологию колоний и способность расти при различных температурах.
- Окончательная идентификация — задача специализированных лабораторий. В них устанавливают вид, вирулентность и принадлежность к группе по Раньону. Для этого выполняют сложные биохимические тесты и ставят биопробу, заражая лабораторных животных (цыплят, мышей или крыс).
Для любой выделенной культуры микобактерий обязательным этапом является определение антибиотикочувствительности. В качестве вспомогательных инструментов применяют бактериоскопию и серологические реакции для выявления антител. Кожно-аллергические пробы в данном контексте имеют малое диагностическое значение.
Эмерджентные инфекции: диагностика Aeromonas spp.
Бактерии рода Aeromonas обитают в водных экосистемах и вызывают инфекции, относящиеся к группе эмерджентных (возникающих или возвращающихся). У человека они провоцируют гастроэнтериты, раневые инфекции, а у лиц с иммунодефицитом — тяжелую септицемию.
Патогенность этих микроорганизмов обусловлена мощными токсинами и ферментами агрессии. К токсинам относятся цитотоксины (аэролизин и цитолизин), гемолизины и энтеротоксины. Примечательно, что термостабильный энтеротоксин имеет антигенное сходство с холерным токсином (также выделяют термолабильный вариант). Среди ферментов агрессии выделяют термостабильную сериновую протеазу и различные металлопротеазы, включая фосфолипазу и хитиназу.
Основной метод диагностики инфекций Aeromonas — бактериологический. Если исследуются фекалии, первичный посев делают в жидкую среду обогащения — щелочную пептонную воду. Через сутки культуру пересевают на плотную среду — кровяной агар с добавлением антибиотика ампициллина. При исследовании отделяемого ран посев проводят параллельно на обе эти среды.
Для идентификации отбирают колонии, вокруг которых образовалась зона гемолиза. Затем проводят тесты на наличие ферментов оксидазы и каталазы. Завершается процесс биохимической идентификацией, алгоритм которой аналогичен работе с энтеробактериями. Лечение таких инфекций строится на этиотропной терапии антибиотиками.
Алгоритм диагностики эшерихий легко запомнить по шагам: Посев (на среды Эндо/Левина) → Агглютинация (с ОВ-сыворотками) → Биохимия (до вида) → Серотип. Запомни аббревиатуру — ПАБС.
Вопросы с занятий и экзамена
Какой метод позволяет обнаружить токсин прямо в материале без посева?
Для этого используют иммунохимический метод, в частности иммуноферментный анализ (ИФА), который выявляет токсин непосредственно в исследуемом образце.
На какие среды сеют материал при подозрении на эшерихиоз?
Весь материал, кроме крови, засевают на дифференциальные лактозосодержащие среды. Самыми распространенными из них являются среды Эндо и Левина.
В чем суть окончательной идентификации микобактерий?
Она проводится в специализированных лабораториях для определения вида, вирулентности и группы по Раньону. Включает биохимические тесты и биопробу — заражение лабораторных животных (мышей, крыс, цыплят).
Как выделяют бактерии рода Aeromonas из фекалий?
Сначала делают первичный посев в среду обогащения — щелочную пептонную воду. Через сутки выросшую культуру пересевают на кровяной агар с добавлением ампициллина.
Что ещё разобрать по теме
- Факторы патогенности Aeromonas spp.: токсины и ферменты
- Классификация микобактерий по группам Раньона
- Дифференциальные лактозосодержащие среды: Эндо и Левина
- Биохимическая идентификация энтеробактерий
- Постановка биопробы на лабораторных животных
Разберите тему целиком в курсе «Микробиология»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Микробиологические тесты» и ещё 4 383 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 141 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «Палочки грамотрицательные факультативно-анаэробные (Энтеробактерии, Вибрионы, Гемофильные, Пастереллы)»
Бесплатные видеоуроки: микробиологияКороткие уроки с конспектами — без регистрации.
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.