Направления применения иммунологических методов
В современной лабораторной практике иммунологические методы применяются в трех принципиально разных направлениях:
- Решение неиммунологических задач. Иммунохимический анализ широко используется для количественного определения гормонов и других физиологически значимых молекул в сыворотке крови. В прошлом для этого применялся радиоиммунологический анализ, сегодня — иммунолигандный анализ (в первую очередь ИФА) и иммуноблоттинг. Преимущества этих методов: высочайшая специфичность, чувствительность и простота. Однако их относительная дешевизна утрачена из-за высокой цены современной регистрирующей аппаратуры. К собственно иммунодиагностике эти методы относятся только тогда, когда измеряются молекулы, участвующие в иммунных процессах (антитела, цитокины).
- Оценка иммунного статуса. Это всесторонняя характеристика состояния иммунной системы без нацеленности на выявление конкретной иммунопатологии. Она применяется для изучения региональных особенностей иммунитета, оценки влияния экологии или связи иммунитета с HLA-генотипом. В клинической практике существует определенная «отрешенность» оценки статуса от реальных задач лечения.
- Иммунодиагностика (в узком смысле). Направлена на поиск конкретных нарушений у больного. Основная этическая проблема иммунодиагностики — назначение пациенту дорогостоящих тестов, которые никак не облегчают постановку диагноза и не вносят вклад в совершенствование терапии.
Эволюция методов и выделение клеток
Исторически иммунодиагностика начиналась с диагностики инфекций, аллергопатологий, типирования групп крови и тканевой совместимости. В 1970-х годах произошел сдвиг парадигмы: врачи начали массово оценивать субпопуляции лимфоцитов и концентрацию сывороточных иммуноглобулинов. Цель сменилась с диагностики активных инфекционных процессов на выявление иммунодефицитных состояний.
Ключевым прорывом в иммунологии стала разработка простого метода выделения лимфоцитов (их часто называют мононуклеарами из-за примеси других клеток).
- Принцип: центрифугирование крови на градиенте плотности.
- Среда: смесь полисахарида фиколла и радиоконтрастного вещества (верографин, гипак или пак).
- Результат: после центрифугирования на дне образуется осадок (эритроциты, сегментоядерные нейтрофилы, эозинофилы, базофилы и большинство моноцитов). Над плотным слоем среды формируется кольцо, где собираются лимфоциты с примесью дендритных клеток и оставшихся моноцитов.
Современные стандарты и проблемы клинической практики
Раньше для идентификации клеток использовали метод розеткообразования, который сегодня признан полностью неадекватным. Современный этап развития стал возможен благодаря гибридомной технологии и созданию моноклональных антител. Это позволило идентифицировать клетки точно по связыванию антител с их рецепторами.
В настоящее время абсолютное большинство задач клинической иммунологии решается двумя высокостандартизированными технологиями:
- Иммуноферментный анализ (ИФА) — для гуморальных факторов.
- Проточная лазерная цитофлуориметрия — для изучения клеток.
При этом до сих пор не решена проблема отсутствия четких стандартов для функциональной характеристики иммунных клеток.
Отдельно стоит отметить разницу в подходах к диагностике. В отечественной практике оценка иммунного статуса стала назначаться избыточно, наравне с рутинными анализами крови и мочи, хотя врачам часто не хватает квалификации для адекватной трактовки этих данных. В то же время, согласно строгим рекомендациям ВОЗ, иммунофенотипирование клеток показано только для диагностики трех состояний: СПИДа, первичных иммунодефицитов и лимфопролиферативных заболеваний.
Как запомнить распределение клеток при центрифугировании на градиенте плотности: тяжелые клетки с сегментированными ядрами (нейтрофилы, базофилы) и плотные эритроциты пробивают градиент и падают в осадок. Легкие клетки с одним круглым ядром (лимфоциты, мононуклеары) плавают сверху, образуя кольцо.
Вопросы с занятий и экзамена
Чем оценка иммунного статуса отличается от иммунодиагностики?
Оценка иммунного статуса — это общее исследование системы без поиска конкретной болезни (например, для оценки влияния экологии). Иммунодиагностика направлена на выявление конкретных нарушений, чтобы поставить диагноз больному или скорректировать его лечение.
Какие клетки остаются в «кольце» после градиентного центрифугирования?
В кольце над градиентом плотности собираются мононуклеары: лимфоциты, дендритные клетки и часть моноцитов. Эритроциты и сегментоядерные клетки уходят в осадок.
Почему не следует назначать анализ на иммунный статус «на всякий случай»?
Это дорогостоящее исследование, результаты которого в общей практике обладают низкой информативностью и часто не влияют на тактику лечения. По рекомендациям ВОЗ, детальное иммунофенотипирование показано только при подозрении на СПИД, первичные иммунодефициты или лимфопролиферативные заболевания.
Что ещё разобрать по теме
- Принципы иммуноферментного анализа (ИФА) и иммуноблоттинга
- Устройство и принципы работы проточного лазерного цитофлуориметра
- Гибридомная технология и синтез моноклональных антител
- Механизмы центрифугирования на градиенте плотности (фиколл-верографин)
- Связь иммунитета с HLA-генотипом
Разберите тему целиком в курсе «Иммунология»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Иммунодиагностика» и ещё 723 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 23 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «Иммунитет в защите и повреждении организма. Патология иммунитета»
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.