Молекулярно-генетические подходы
В арсенале современной лабораторной диагностики важное место занимают технологии амплификации нуклеиновых кислот, которые позволяют изучать иммунную систему на уровне генов.
- Качественная полимеразная цепная реакция (ПЦР) активно используется для генетического типирования. В частности, этот метод незаменим при определении аллелей системы HLA, особенно когда речь идет об антигенах II класса.
- Количественная ПЦР в реальном времени с обратной транскрипцией — перспективный и активно внедряющийся в рутинную практику инструмент. С его помощью специалисты могут точно измерять уровень экспрессии специфических генов, кодирующих иммунологически значимые молекулы.
Особенности оценки функции иммунных клеток
В отличие от строго регламентированных биохимических анализов, методы оценки функциональной активности иммунных клеток отличаются колоссальным методологическим разнообразием. Из-за этого они значительно слабее стандартизированы по сравнению с другими лабораторными технологиями.
Подходы к анализу механизмов врожденного и адаптивного иммунитета имеют существенные различия. Так, для оценки состояния врожденного иммунитета рутинный подсчет количественного состава миелоидных клеток (по обычному анализу крови) малоинформативен в контексте их работоспособности. Поэтому главный упор здесь делается почти исключительно на функциональные тесты.
Изучение фагоцитарной активности
Фагоцитоз — базовый процесс защиты, обеспечиваемый врожденным иммунитетом. Для его изучения применяются два основных подхода:
- Традиционный (микроскопический) метод. Врач изучает окрашенные мазки, куда предварительно добавили объекты для поглощения (микроорганизмы либо инертные частицы латекса). Рассчитываются два ключевых показателя:
- Фагоцитарный индекс: доля клеток (в процентах), которые успешно осуществили захват тест-частиц.
- Фагоцитарное число: среднее количество частиц, поглощенных одной активной клеткой.
Недостатки классического подхода: высокая трудоемкость, влияние субъективного мнения исследователя и крайняя сложность унификации результатов.
- Современный метод. Базируется на проточной цитометрии. Вместо визуального подсчета используются бактерии или частицы, предварительно меченные флуорохромами, что позволяет прибору автоматически регистрировать активность поглощения.
Анализ бактерицидности и секреторной функции
Способность фагоцита захватить патоген важна, но с функциональной точки зрения гораздо значимее оценить бактерицидность — способность переварить и уничтожить мишень.
- Тест на завершенность фагоцитоза. Классический вариант основан на оценке того, насколько снижается число жизнеспособных микроорганизмов, высеваемых из лизата фагоцитов. Сегодня также разработаны более простые аналоги этого теста на базе проточной цитометрии.
- Реакция восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест). Метод косвенной оценки бактерицидного потенциала. Активность клеток определяют по визуальному появлению синего окрашивания — результату внутриклеточного отложения гранул формазана.
- Оценка генерации активных форм кислорода (АФК). Усовершенствованная методика, опирающаяся на регистрацию хемолюминесценции. В образец добавляют люминофоры (люцигенин или люминол), и специализированный прибор (хемилюминометр) фиксирует свечение. Регистрация происходит автоматически, при этом оценивается как спонтанная, так и индуцированная стимуляторами реакция.
Еще один важный параметр врожденного иммунитета — секреторная активность. В ходе теста in vitro изучают способность клеток вырабатывать провоспалительные цитокины (IL-1β, TNFα и др.). Лейкоциты крови или выделенные макрофаги стимулируют бактериальными агентами — чаще всего для этого применяется липополисахарид (ЛПС) из Escherichia coli — после чего замеряют уровень выброса цитокинов.
Чтобы не путать показатели фагоцитоза: ИНДЕКС — это ПРОЦЕНТ (доля клеток, вступивших в работу), а ЧИСЛО — это ШТУКИ (сколько частиц съела одна клетка).
Вопросы с занятий и экзамена
Почему для врожденного иммунитета используют именно функциональные тесты?
Количественный состав миелоидных клеток легко определяется с помощью рутинного клинического анализа крови. Однако само по себе количество не отражает реальную способность клеток защищать организм, поэтому необходимы тесты, оценивающие их работу.
В чем принципиальная разница между фагоцитарным индексом и фагоцитарным числом?
Индекс показывает процентное соотношение клеток, которые вообще смогли осуществить фагоцитоз. Число же отражает индивидуальную «вместимость» — среднее количество частиц, поглощенных одной клеткой.
Что выступает индуктором при оценке секреторной активности макрофагов?
В лабораторной практике клетки стимулируют in vitro бактериальными агентами. Чаще всего для запуска выработки провоспалительных цитокинов используют липополисахарид (ЛПС), полученный из Escherichia coli.
Для чего в клинической иммунологии применяется качественная ПЦР?
Этот молекулярно-генетический метод чаще всего используется для точного типирования антигенов главного комплекса гистосовместимости (HLA), в особенности молекул II класса.
Что ещё разобрать по теме
- Механизмы генерации активных форм кислорода фагоцитами
- Принципы проточной цитометрии в иммунологии
- Роль провоспалительных цитокинов IL-1β и TNFα в иммунном ответе
- Количественная ПЦР в реальном времени с обратной транскрипцией
- Строение и функции молекул главного комплекса гистосовместимости (HLA)
Разберите тему целиком в курсе «Иммунология»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Молекулярно-генетические методы в иммунологии» и ещё 723 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 23 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «Иммунитет в защите и повреждении организма. Патология иммунитета»
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.