Лабораторная стратегия и выбор сред
Поскольку различные микроорганизмы могут вызывать схожую клиническую картину заболевания, в микробиологии применяется принцип «батареи сред». Он подразумевает одновременное использование целого набора селективных и дифференциально-диагностических сред для посева одной пробы. Это значительно повышает шансы на успешное обнаружение и первичную идентификацию возбудителя.
Каждая среда из «батареи» предназначена для своей группы микроорганизмов:
- Среда Эндо — используется для выделения энтеробактерий.
- Желточно-солевой агар — оптимален для роста стафилококков.
- ЦПХ-агар (с цетилпиридиний-хлоридом) — применяется для селективного выделения синегнойной палочки.
- Среда Сабуро — предназначена для культивирования грибов.
- Тиогликолевая среда — необходима для выявления анаэробов.
Тактика посева в зависимости от биотопа
Выбор питательной среды напрямую зависит от того, является ли локус, из которого взят материал, стерильным в норме.
- Стерильные локусы (кровь, ликвор). В норме эти жидкости не содержат микроорганизмов. Любой выявленный микроб потенциально является возбудителем. Поэтому материал засевают на богатые питательные среды, чтобы обеспечить максимально благоприятные условия для роста максимально широкого спектра микроорганизмов.
- Нестерильные локусы (биотопы с нормальной микрофлорой). В таких пробах всегда присутствует сопутствующая флора. Чтобы она не «забила» рост искомого патогена, применяют селективные (элективные) среды. Их главная задача — подавить рост нормальной флоры и позволить размножаться конкретному возбудителю.
Количественный анализ при гнойно-воспалительных инфекциях
При диагностике инфекций, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, качественного обнаружения (ответа «да/нет») недостаточно. Обязательным условием является количественное определение (оценка обсемененности). Это необходимо для дифференциации истинной этиологической роли микроба от банального бактерионосительства.
Для определения концентрации используют метод серийных разведений или посев «штрихом» по Голду (секторальный посев). Интерпретация результатов строится на следующих критериях:
- Высокая концентрация: выделение одного или двух видов микроорганизмов в большом количестве (КОЕ). Это прямо указывает на их роль как главного этиологического фактора.
- Низкая концентрация: обнаружение ассоциации из множества видов в малом количестве. Как правило, это свидетельствует о контаминации (загрязнении) пробы нормальной микрофлорой пациента или флорой окружающей среды.
Культивирование и антибиотикочувствительность
На втором этапе исследования каждую порцию материала предварительно высевают в среду накопления (например, селенитовый бульон в соотношении 1:10), а также параллельно делают высевы на плотные и жидкие среды (кровяной агар, среду Эндо, тиогликолевую среду).
Условия инкубации стандартны: посевы помещают в термостат при температуре 37 °C. Если подозревается анаэробная инфекция, культивирование проводят в специальных приборах — анаэростатах.
Существуют специфические протоколы, например, для выделения сальмонелл. В этом случае материал из среды накопления и нативной желчи высевают на висмут-сульфитный агар в течение последующих 3 дней.
После подсчета колоний и определения вида проводят оценку антибиотикочувствительности. Важное правило: анализ проводится только для этиологически значимых возбудителей. Если выявлена микробная ассоциация (несколько значимых патогенов), чувствительность к препаратам определяют для каждого участника этой ассоциации отдельно.
Для запоминания профиля сред используйте ассоциации по первым буквам или смыслу: Эндо — Энтеробактерии (совпадение слогов), Желточно-солевой — Золотистый стафилококк (желтый цвет колоний).
Вопросы с занятий и экзамена
Почему при посеве используют сразу несколько питательных сред?
Из-за того, что разные возбудители могут вызывать заболевания со схожей клинической картиной, применяется принцип «батареи сред». Использование сразу нескольких дифференциально-диагностических и селективных сред позволяет не упустить искомый патоген.
Зачем определять количество микроорганизмов при гнойных инфекциях?
Гнойно-воспалительные инфекции часто вызываются условно-патогенной флорой. Количественный анализ необходим, чтобы отличить истинного возбудителя (присутствует в высокой концентрации) от обычного носительства или контаминации пробы.
Какие среды применяют для посева крови и ликвора?
Кровь и ликвор — это в норме стерильные локусы. Для них используют богатые питательные среды, чтобы обеспечить беспрепятственный рост любых микроорганизмов, оказавшихся в пробе.
Как определяют антибиотикочувствительность при смешанных инфекциях?
Если в материале выявлена ассоциация из нескольких возбудителей, чувствительность к препаратам обязательно определяется индивидуально для каждого ассоцианта, при условии их этиологической значимости.
Что ещё разобрать по теме
- Механизмы подавления нормальной флоры в селективных средах
- Техника секторального посева по методу Голда
- Алгоритм постановки метода серийных разведений
- Устройство и принципы работы анаэростата
- Особенности роста сальмонелл на висмут-сульфитном агаре
Разберите тему целиком в курсе «Микробиология»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Лабораторный этап микробиологического исследования» и ещё 4 383 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 141 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «Клиническая микробиология»
Бесплатные видеоуроки: микробиологияКороткие уроки с конспектами — без регистрации.
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.