Природа и свойства цоликлонов
Цоликлоны анти-А и анти-В применяются в хирургии и трансфузиологии взамен стандартных изогемагглютинирующих сывороток. По своей природе это моноклональные антитела, относящиеся к классу IgM.
Они вырабатываются специальными клетками — гибридомами. Гибридома представляет собой результат слияния мышиных В-лимфоцитов (которые образуют антитела) с клетками мышиной миеломы. Готовый реагент — это разведенная асцитическая жидкость, полученная от мышей-носителей таких гибридом.
Главное преимущество цоликлонов заключается в том, что они обеспечивают более быструю и выраженную реакцию агглютинации. Выпускаются препараты в жидком виде (во флаконах или ампулах), при этом анти-А окрашен в красный цвет, а анти-В — в синий. Хранить реагенты необходимо в холодильнике при температуре от 2 до 8 °C, срок их годности составляет 2 года.
Техника проведения исследования
Для получения достоверных результатов необходимо строго соблюдать методику. Реакцию проводят при температуре окружающей среды от 15 до 25 °C. В качестве рабочей поверхности используют белую фарфоровую пластину или маркированную тарелку.
Пошаговый алгоритм действий:
- На подготовленную поверхность наносят по одной большой капле цоликлонов анти-А и анти-В.
- Рядом с каждой каплей реагента наносят исследуемую кровь. Объем капли крови должен быть в 10 раз меньше объема капли цоликлона.
- С помощью отдельных стеклянных палочек (или уголков предметных стекол) капли аккуратно смешивают.
- Пластинку слегка покачивают для лучшего взаимодействия компонентов.
Визуально реакция обычно начинает проявляться уже в первые 3–5 секунд. В положительных случаях образуются мелкие красные агрегаты из эритроцитов, которые быстро переходят в крупные хлопья. Итоговое наблюдение за процессом и окончательную оценку проводят в течение 2,5 минут.
Интерпретация результатов
Оценка группы крови по системе AB0 базируется на наличии (+) или отсутствии (–) агглютинации эритроцитов с конкретным цоликлоном. Возможны четыре варианта развития событий:
- Группа I (0): реакция отсутствует с обоими цоликлонами — анти-А (–) и анти-В (–). Вывод: в эритроцитах нет агглютиногенов А и В.
- Группа II (A): агглютинация наблюдается только с анти-А (+) и отсутствует с анти-В (–). Вывод: эритроциты содержат агглютиноген А.
- Группа III (B): агглютинация отсутствует с анти-А (–) и наблюдается с анти-В (+). Вывод: эритроциты содержат агглютиноген В.
- Группа IV (AB): реакция склеивания происходит с обоими цоликлонами — анти-А (+) и анти-В (+). Вывод: эритроциты содержат оба агглютиногена А и В.
Дополнительный контроль при IV (AB) группе
Если при исследовании выявлена положительная реакция с обоими реагентами, предварительно выставляется группа крови IV (AB). Однако этот результат требует обязательного подтверждения, чтобы исключить феномен неспецифической агглютинации.
Для контроля используют изотонический раствор хлорида натрия (NaCl). На пластину наносят большую каплю (0,1 мл) физиологического раствора и смешивают ее с маленькой каплей (0,01 мл) исследуемой крови. Если в этой контрольной капле агглютинация отсутствует, истинность IV группы крови подтверждается.
Примечание: Если на любом этапе исследования возникает сомнительная агглютинация, метод с цоликлонами дополняют классическим методом с использованием стандартных эритроцитов.
Чтобы не перепутать маркировку: анти-А — Алый (красный цвет), анти-В — синий.
Вопросы с занятий и экзамена
Можно ли проводить реакцию при температуре 37 °C?
Нет, исследование должно проводиться строго при температуре окружающей среды от 15 до 25 °C.
В какой пропорции смешивают кровь и реагент?
Капля исследуемой крови должна быть примерно в 10 раз меньше капли цоликлона.
Что делать, если агглютинация выражена слабо или вызывает сомнения?
При наличии сомнительной агглютинации необходимо перейти к определению группы крови методом со стандартными эритроцитами.
Что ещё разобрать по теме
- Строение и функции моноклональных антител (IgM)
- Принципы получения гибридом в иммунологии
- Причины возникновения неспецифической агглютинации
- Методика определения группы крови со стандартными эритроцитами
- Антигенная система эритроцитов AB0: агглютиногены и агглютинины
Разберите тему целиком в курсе «Общая хирургия»
Здесь — выжимка. В курсе — всё, что спрашивают на занятии и экзамене.
- Полная методичка по теме «Определение группы крови с помощью цоликлонов» и ещё 3 335 страниц предмета
- Задания и тесты после каждой темы — как на коллоквиуме
- AI-тьютор ответит на вопрос по теме в любое время
- 70 видеоуроков по предмету
Другие темы раздела «ГЛАВА 6. ПЕРЕЛИВАНИЕ КРОВИ»
Материал подготовлен преподавателями Школы Сеченова по учебной программе медицинских вузов. Носит образовательный характер.